プロトコール集

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[8] ベクターの制限酵素処理と脱リン酸化 - 2005/06/12(Sun) 09:29: ベクターの制限酵素処理と脱リン酸化のプロトコールです。
Fermentas 社の Shrimp Alkaline phosphatase を使っています。
遺伝子組換えを行うときにベクターの自己ライゲーションを防止する目的で使う方法です。
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[7] PCR 産物の blunting および kination - 2005/06/11(Sat) 11:33: PCR 産物の blunting および kination のプロトコールです。5'リン酸化修飾していないプライマーを使って PCR した DNA 断片をブラントエンドでベクターにクローニングするときなどに使います。

この方法を使うと KOD や pfu などの proofreading 活性を持ち、3'末端に A が付かなくて TA クローニングできないタイプのポリメラーゼで PCR した DNA 断片もクローニングできます。
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[6] COS-7細胞へのエレクトロポレーション - 2005/06/07(Tue) 20:08: COS-7細胞へのエレクトロポレーションによる遺伝子導入法です。
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[5] AGPC法による total RNA の調製 - 2005/06/07(Tue) 20:06: AGPC法による total RNA の調製をキットを使わずに行う方法です。最近では Invitrogen 社の Trizol などを使ったほうがいいかも。
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[4] dish のゼラチンコート - 2005/06/07(Tue) 20:03: 細胞培養用 dish をゼラチンコートする方法です。
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[3] マウスの個体識別法 - 2005/06/03(Fri) 23:56: マウスの耳にパンチ穴を開け、個体識別を行う方法です。この方法では 99 匹まで識別することができます。
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[2] ES細胞のアルカリフォスファターゼ染色 - 2005/06/03(Fri) 23:53: ES細胞の分化状態をモニタリングするためのアルカリフォスファターゼ染色のプロトコールです。
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[1] 1st strand cDNA 合成 - 2005/06/03(Fri) 23:49: Invitrogen 社の SuperScriptII を使った 1st strand cDNA 合成のプロトコールです。
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